Thông tin chung

Nội dung

1) Tên nhiệm vụ: Nghiên cứu quy trình sản xuất hormone kích thích sinh sản một số loài hải sâm có giá trị kinh tế ở Việt Nam

2) Cấp quản lý: Bộ NN&PTNT

3) Tổ chức chủ trì: Viện nghiên cứu Hải sản

4) Họ và tên chủ nhiệm: TS. Hoàng Đình Chiều

5) Thành viên tham gia chính:

- ThS. Lưu Xuân Hòa

- TS. Nguyễn Văn Nguyên

- TS. Lê Thanh Tùng

- ThS. Nguyễn Thị Tuyết Mai

- ThS. Bùi Minh Tuấn

- ThS. Nguyễn Kim Thoa

- KS. Phạm Trần Đình Nho

- TS. Nguyễn Đình Quang Duy

- TS. Lê Văn Tường

6) Mục tiêu của nhiệm vụ:

* Mục tiêu chung: Chủ động sản xuất được hormone kích thích sinh sản một số loài hải sâm có giá trị kinh tế ở biển Việt Nam.

* Mục tiêu cụ thể:

- Xây dựng được quy trình công nghệ sản xuất hormone kích thích sinh sản một số loài hải sâm có giá trị kinh tế ở Việt Nam;

- Thực nghiệm kích thích sinh sản bằng hormone ở loài hải sâm đen và hải sâm vú với tỷ lệ kích thích sinh sản > 70%; Tỷ lệ thụ tinh > 80%; tỷ lệ nở >70%; tỷ lệ sống của ấu trùng sau khi nở đến auricularia > 50%;

- Sản xuất được tối thiểu 500mg hormone tinh sạch > 80% (dự kiến liều lượng hormone sử dụng 150-200μg/kg cá thể bố mẹ).

7) Kết quả thực hiện:

- Cấu trúc trình tự gene RGP kích thích sinh sản của loài hải sâm đen đã được phân tích, thiết kế (TRLCGRELSRAIYRICSHGGSGSHHHHHHGSGSSGGIARRCCASGCSSSDIAKLC) và lựa chọn được chủng nấm men P. pastoris SMD1168 phục vụ cho quy trình tái tổ hợp hormone.

- Vector biểu hiện hormone RGP thông qua vi khuẩn E. coli đã được thiết kế. Plasmid pPIC9K-RGP đã được tách chiết kiểm tra chất lượng tốt với 98% mức độ tương đồng khi giải trình tự plasmid và sản phẩm plasmid pPIC9K-RGP có thể thực hiện cắt giới hạn bởi đồng thời cặp enzyme EcoRI và NotI.

- Chủng nấm men tái tổ hợp biểu hiện hormone RGP (pPIC9K-RGP) đã được tạo ra và kiểm tra, sàng lọc qua môi trường có kháng sinh G418 ở các nồng độ 0 mg/ml, 1 mg/ml và 2 mg/ml và biểu hiện tốt hormone RGP. Các thể biến nạp nấm men pPIC9KRGP có kiểu hình Mut+ và kiểu gen như thiết kế ban đầu.  

- Các thể biến nạp nấm men pPIC9K-RGP phát triển tốt trong môi trường nuôi BMM có bổ sung methanol và bắt đầu phát triển nhanh sau 24h giờ nuôi, đạt tốc độ tăng trưởng nhanh nhất trong khoảng thời gian từ 36 - 42h. Sau 3 ngày nuôi cấy, dung dịch hormone RGP đã được thu gom và kiểm tra có biểu hiện RGP tiết ngoại bào. 

- Kết quả thí nghiệm đã lựa chọn được phương án tinh sạch hormone sử dụng His-tag (dung dịch chất bám Ni-NTA), kết hợp với ống siêu lọc Amicon 3K (UFC500308 - 3K NMWL). Hiệu suất tinh sạch bằng dung dịch Ni-NTA cho kết quả thu gom hormone là 2,88 mg/l dung dịch nuôi nấm men, hormone đạt độ tinh sạch > 80%.

- Hormone RGP sau khi tinh sạch đã được kiểm tra hoạt tính sinh học. Kết quả thí nghiệm đã lựa chọn được nồng độ hormone RGP 0,012 μg/μL là phù hợp để thử nghiệm chín muồi trứng bằng thí nghiệm GVBD và nồng độ 0,025 μg/μL RGP trong 1ml dung dịch hormone (tương đương 100 μg hormone/kg cá thể hải sâm) là phù hợp để tiêm vào hải sâm kích thích sinh sản trong khoảng thời gian 1-3h.

- Quy trình sản xuất hormone kích thích sinh sản một số loài hải sâm có giá trị kinh tế ở Việt Nam đã được xây dựng và thực nghiệm với độ tinh sạch > 85,2 %; tỉ lệ kích thích sinh sản > 70%; Tỉ lệ thụ tinh > 80%; tỉ lệ nở > 70%; tỉ lệ sống của ấu trùng sau khi nở đến auricularia > 50% đối với cả 2 loài hải sâm đen và hải sâm vú.

8) Thời gian bắt đầu - kết thúc: 01/2022 - 12/2024.

9) Kinh phí thực hiện: 4.300,0 triệu đồng, trong đó kinh phí từ NSNN: 4.300,0 triệu đồng, nguồn khác: 0 triệu đồng